JACS：中科大梁好均的团队开发基于CRISPR-dCas9的可编程转录调节器

T 肝细胞中的共表达出来时，通过观察到通过 qRT-PCR 计算的靶DNA的 mRNA 水平显着减少（示意图2a）。此外，与现代应用于的 dCas9-VPR 的系统相对来说，新桥 RNA 酪氨酸的RNA诱导的系统使 NeuroD1 表达出来减少 6.1 倍，使 ACTC1 表达出来减少 2.9 倍（示意图2b）。此外，必要性的研究成果说明了，很强极较差基础表达出来的DNA在的系统中的更是昧诱导，这与早期研究成果一致。

示意图2：应用于 HEK293T 肝细胞内源DNA诱导的新桥 RNA 酪氨酸的 dCas9 模拟器

为了转化成仅在 microRNA 西北面极较差水平时才允许DNA诱导的双反向的系统，首先，引进了相互竞争来抑制基于 dCas9 的DNA诱导。在新设计中的，应用于 tdMCP（V29I）受体与 dCas9-tdMCP 竞争相结合新桥 RNA MS2-2×PP7（示意图 3a）。竞争对手毁损了新桥 RNA 酪氨酸的RNA诱导多胺的形成，从而中的断了报告DNA的诱导。为了增进竞争对手与新桥 RNA MS2-2×PP7 的相结合，在 dCas9-tdMCP 的两个 MCP 中的引进了一个也就是说DNA突变，以丧失 dCas9 融为一体和新桥 RNA MS2-2×PP7 错综复杂的张力。dCas9 融为一体与 MCP 在不尽不尽相同位置发生DNA突变，并产生了与野生型 MCP 的 dCas9 融为一体。然后，在新桥 RNA 酪氨酸的的系统中的，在有或不会竞争对手 tdMCP（V29I）的意味着，检测了五种 dCas9 融为一体的报告DNA诱导。结果说明了，当单独应用于五个 dCas9 融为一体时，报告DNA的表达出来在不会竞争对手的意味着减少了 65 到 646 倍。然而，在存在竞争对手的意味着，发光显着降较差，证明了竞争对手在与新桥 RNA 相结合多方面的优势。为了赢得更是极较差的控制器和更是较差的泄漏，dCas9-tdMCP（V29I）应用于以下研究成果。接下来，为了抑制相互竞争的表达出来，将四个每一次的 microRNA 基本上互补的靶位点融为一体到相互竞争的 3'-非译成第一区 (3'-UTR) 中的，以实现 microRNA 传感 （tdMCP(V29I)-TmiR- X）。一旦相互竞争被极较差水平的 microRNA 沉默，预计报告DNA的极较差控制器水平（示意图3a）。为了评估新设计的可靠性，应用于在 HEK293T 肝细胞中的极较差度表达出来的 miR-17-5p、miR-20a 和 miR-106a来实现三个 microRNA 传感。之前简化 dCas9 融为一体生产量和 dCas9 融为一体与相互竞争的百分比，并通过观察到相对来说较缺乏 microRNA 靶位点的电阻的控制器极较差 52 到 118 倍，应用于模拟较差 microRNA 水平（示意图3b）。

示意图3：自发 microRNA 操纵DNA表达出来

癌肝细胞的标记和裂解对于精准治疗法很强不可忽视本质。为了扩展应用于肝细胞标记和裂解的 microRNA 自发电阻，通过将四个每一次的 miR-21 核酸融为一体到相互竞争的 3 '-UTR （tdMCP(V29I)-T21）。MiR-21 在 HCT116 肝细胞中的极较差表达出来，但在 HEK293T 肝细胞中的并不多表达出来，是归入这两种肝细胞类型的平庸生物研究课题。通过简化 dCas9 融为一体生产量和 dCas9 融为一体与竞争对手的比例，实现了 HCT116 和 HEK293T 肝细胞错综复杂 22 倍的发光差异。电阻效能的一个关键相对来说较是异质肝细胞群的免疫和选择性。

将电阻输送到 HEK293T-EGFP 和 HCT116 肝细胞的肝细胞氢氧化钠中的（示意图4a）。此外，在不会竞争对手的意味着，由新桥 RNA 酪氨酸的的系统诱导的本体控制器用作相符合。在用完整电阻转染的肝细胞氢氧化钠中的，dTomato 极较差群体相对来说较相符合极端偏向 HCT116 肝细胞（示意图4b）。dTomato-high 肝细胞中的 HCT116 的肝细胞丰度从 11.1% 减少到 92.2%（示意图4c），说明了自发 miR-21 的新桥 RNA 酪氨酸的的系统是 HCT116 肝细胞标记和裂解的必要模拟器。然而，由于 dCas9 融为一体和新桥 RNA 错综复杂的相结合并不多，HEK293T-EGFP 肝细胞中的的电阻说明了出渗漏的背景。为了减少泄漏，可以通过将 microRNA 靶位点融为一体到 dCas9 融为一体或震荡融为一体的 3'-UTR 中的来引进由 HEK293T 极较差标示重新钳制的传感，以进行时必要性研究成果。

示意图4：肝细胞氢氧化钠中的的 HCT116 肝细胞检验

中的国技术创新医学院极较差分子生物学与土木工程系何苗博士和周翔哈佛医学院为篇文章共同第一笔记，梁好均医学院教授、刘映画特任副研究成果员、周翔哈佛医学院为共同通讯笔记。

梁好均，巢湖扰宏观物质生物学国家研究成果中的心研究成果员，中的国技术创新医学院极较差分子生物学与土木工程系医学院教授、博士生恩师，2005年国家自然生物学基金赢得者。梁好均医学院教授已在 Nat. Rev. Methods Primers、PNAS、JACS、Angew. Chem. Int. Edit.、Adv. Mater.、ACS Nano、Nucleic. Acids. Res. 等极较差影响力学术刊物上登载篇文章两百余篇。梁好均医学院教授于2022年2年底11日13时10分在江苏巢湖差一点身故，59岁。深切缅怀梁好均医学院教授，来向他在极较差分子模拟、DNA纳米材料以及制备生物学多方面的突出贡献。

篇文章元数据：

本文转载自其他网站，不代表健康界论点和立场。如有细节和示意图片的专利权异议，请及时联系我们（邮箱：guikequan@hmkx.cn）

。

经常便秘是什么原因怎么调理
衡阳治疗白癜风医院费用
关节僵硬吃什么药
结膜炎怎么治疗好的最快
小儿积食消化不良怎么办
河豚中毒
感冒咳嗽怎么缓解
抗病毒治疗
干眼症异物感怎么能消失
治疗干眼症最好方法